Vad är en spektrofotometer?
En spektrofotometer belyser ett prov med ljus av en vald våglängd och mäter hur stor andel som passerar igenom. Skillnaden mellan infallande och transmitterat ljus uttrycks som absorbans. En UV-Vis-spektrofotometer arbetar typiskt i området 190–1100 nm, vilket täcker både ultraviolett och synligt ljus samt en del av det nära infraröda.
Lambert-Beers lag
Grunden för kvantitativ analys är Lambert-Beers lag: A = ε · c · l, där A är absorbansen, ε den molära extinktionskoefficienten, c koncentrationen och l ljusvägens längd (oftast 1 cm). Eftersom absorbansen är linjärt proportionell mot koncentrationen kan ett okänt prov bestämmas genom jämförelse mot en standardkurva.
Enkelstråle eller dubbelstråle
| Egenskap | Enkelstråle | Dubbelstråle |
|---|---|---|
| Strålgång | En, prov och referens mäts separat | Två, prov och referens samtidigt |
| Baslinjestabilitet | Känsligare för lampdrift | Kompenserar drift automatiskt |
| Genomströmning | Enklare rutinanalys | Krävande metoder, svep |
| Pris | Lägre | Högre |
Enkelstråleinstrument passar rutinmätningar och enklare budget, medan dubbelstråle ger bättre stabilitet vid våglängdssvep och långa mätserier.
Kyvetter
Provet hålls i en kyvett med känd ljusväg:
- Kvartskyvetter: Släpper igenom UV-ljus, krävs under ~300 nm (t.ex. DNA/protein vid 260/280 nm).
- Glaskyvetter: För synligt ljus, tåliga och återanvändbara.
- Plastkyvetter (engångs): Bekväma för synligt område men olämpliga i UV.
Tillämpningar
- DNA- och RNA-kvantifiering: Absorbans vid 260 nm, renhet via 260/280- och 260/230-kvoter.
- Proteinbestämning: Vid 280 nm eller via färgreagens (Bradford, BCA).
- Koncentrationsbestämning: Färgade lösningar, enzymkinetik, kvalitetskontroll.
Så väljer du rätt spektrofotometer
Börja med ditt våglängdsområde: behöver du UV krävs deuteriumlampa och kvartskyvetter, medan enbart synligt ljus räcker för enklare instrument. Väg in behov av dubbelstråle, spektralbandbredd, provvolym samt om du vill ha mikrovolymmätning för nukleinsyror.
Osäker på vilken modell som matchar dina analyser och din budget? Begär en kostnadsfri offert så hjälper vi dig jämföra instrument och tillbehör.